Plasmid Maxi Kit 10 preps PD1511-01

Plasmid Maxi Kit 10 preps PD1511-01 kualitas terbaik dan harga murah, produk tersertifikasi kalibrasi Akreditasi KAN. Produk terbaik hanya di BMDStore.COM

Product Description

Buffer A1, B1, C1, Elution Buffer, RNase A, Maxi columns (flat bottom) (2), User Manual(1)

Introduction

Kunci kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang sangat efisien ke matriks ezBindTM kami sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer. Tidak seperti kit lain di pasaran, kit pemurnian plasmid kami yang telah dipatenkan tidak memiliki garam chaotropic di buffernya. DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 100 hingga 250 mL kultur E. coli. Kolom maxi memiliki kapasitas pengikatan DNA plasmid 1 mg. DNA plasmid yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti transfeksi sel kuat seperti HEK293, pemetaan restriksi, skrining perpustakaan, sekuensing, serta terapi gen dan vaksinasi genetik.

Important Notes

Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 hingga 3 kali. Tabel Referensi 1 untuk plasmid yang umum digunakan,

Table 1 Commonly used plasmids.

Plasmid Origin Copy Numbers Expected Yield(µg per  200 mL)
PSC101 pSC101

5

12

pACYC P15A

10-12

25-40

pSuperCos pMB1

10-20

30-50

PBR322 pMB1

15-20

35-50

pGEMR Muted pMB1

300-400

350-450

pBluescriptR ColE1

300-500

450-600

PUC Muted pMB1

500-700

700-1,000

Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Untuk memurnikan DNA plasmid dari strain endA + (Tabel 2), kami merekomendasikan menggunakan produk PD1713.

Table2 endA+ strains of E. Coli.

EndA- Strains of E. Coli
DH5α DH1 DH21 JM106 JM109 SK2267 SRB XLO
TOP10 DH10B JM103 JM107 SK1590 MM294 Stbl2TM XL1-Blue
BJ5182 DH20 JM105 JM108 SK1592 Select96TM Stbl4TM XL10-Gold

 

EndA+ Strains of E. Coli
C600 JM110 RR1 ABLE® C CJ236 KW251 P2392 BL21(DE3)
HB101 TG1 TB1 ABLE® K DH12STM LE392 PR700 BL21(DE3)pLysS
JM101 JM83 TKB1 HMS174 ES1301 M1061 Q358 BMH 71-18
All NM  strains All Y strains

Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom maxi memiliki biomassa optimal 450-550. Misalnya, jika OD600 adalah 2,5, volume kultur optimal harus 200 mL. Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.

Storage and Stability

Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.

Before Starting

Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet instruksi ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah.

Important

RNase A: Stabil selama lebih dari setengah tahun bila disimpan pada suhu kamar. Putar botol RNase A sebentar. Tambahkan larutan RNase A ke Buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan, lalu simpan pada suhu 4oC.
Buffer B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50oC untuk melarutkan endapan sebelum digunakan.
Menginkubasi Buffer C1 pada suhu 4 oC sebelum dilakukan percobaan akan menurunkan endapan mengambang.
Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan.
Pastikan ketersediaan centrifuge dan vacuum manifold, terutama setelah mencampurkan lisat dengan ethanol maka sampel perlu segera diolah baik dengan cara sentrifugasi maupun vakum.
Lakukan semua sentrifugasi pada suhu ruangan.

Materials supplied by users

  • 70% ethanol and 100% ethanol
  • High speed centrifuge
  • 30 mL high speed centrifuge tubes
  • 50 mL tubes

Kit contents

Catalog#

PD1511-00

PD1511-01

PD1511-02

Preps

2

10

25

ezBindTM Columns

2

10

25

Buffer A1

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer B1

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer C1

27 mL

135 mL

330 mL

RNase A(20 mg/mL)

2.2 mg(110 µL)

11 mg(550 µL)

27 mg(1.35 µL)

Elution Buffer

6 mL

30 mL

60 mL

User Manual

1

1

1

Safety Information

Buffer C1 mengandung asam asam, pakai sarung tangan dan kacamata pelindung saat menangani.
Buffer C1 mengandung garam chaotropic, yang dapat membentuk senyawa reaktif jika digabungkan dengan pemutih. Jangan menambahkan pemutih atau larutan asam langsung ke limbah persiapan.

Operating Protocol

Reviews

There are no reviews yet.

Be the first to review “Plasmid Maxi Kit 10 preps PD1511-01”