Product Description
Introduction
Kunci dari kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang dapat dibalik dengan sangat efisien ke kolom mini sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat kemudian dielusi dengan air steril atau buffer elusi. Plasmid yang diisolasi dengan protokol tradisional biasanya mengandung endotoksin tingkat tinggi (lipopolisakarida atau LPS). Untuk transfeksi jalur sel sensitif endotoksin atau injeksi mikro, endotoksin harus dibuang sebelum aplikasi. Sistem endofree EZgeneTM menggunakan buffer yang diformulasikan secara khusus yang mengekstrak endotoksin dari DNA plasmid. Ekstraksi dua putaran akan menurunkan tingkat endotoksin menjadi 0,1 EU (Endotoksin) per µg DNA plasmid. Kit miniprep plasmid ujung tiga menyediakan langkah pembuangan endotoksin yang efisien ke dalam prosedur pemurnian tradisional untuk menghasilkan DNA plasmid tingkat transfeksi. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 3 hingga 5 mL kultur E. coli. Kolom mini memiliki kapasitas pengikatan DNA 50 µg. Hasil dari 1 mL kultur biasanya sekitar 8 sampai 12 µg. Endofree DNA yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti transfeksi jalur sel sensitif endotoksin, sel biakan primer atau injeksi mikro.
Important Notes
Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 kali. Silakan lihat Tabel 1 untuk plasmid yang umum digunakan.
Table 1 Commonly used plasmid and expected yield.
| Plasmid |
Origin |
Copy Numbers |
Expected Yield
(µg per 1 mL)
|
| pSC101 |
pSC101 |
5
|
0.1-0.2
|
| pACYC |
P15A |
10-12
|
0.4-0.6
|
| pSuperCos |
pMB1 |
10-20
|
0.4-1
|
| pBR322 |
pMB1 |
15-20
|
0.6-1
|
| pGEMR |
Muted pMB1 |
300-400
|
6-7
|
| pBluescriptR |
ColE1 |
300-500
|
6-8
|
| pUC |
Muted pMB1 |
500-700
|
8-12
|
Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10, dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Silakan lihat Tabel 2 untuk informasi akhirA.
Table2 endA strains of E. Coli.
| EndA- Strains of E. Coli |
| DH5α |
DH1 |
DH21 |
JM106 |
JM109 |
SK2267 |
SRB |
XLO |
| TOP10 |
DH10B |
JM103 |
JM107 |
SK1590 |
MM294 |
Stbl2TM |
XL1-Blue |
| BJ5182 |
DH20 |
JM105 |
JM108 |
SK1592 |
Select96TM |
Stbl4TM |
XL10-Gold |
| EndA+ Strains of E. Coli |
| C600 |
JM110 |
RR1 |
ABLE® C |
CJ236 |
KW251 |
P2392 |
BL21(DE3) |
| HB101 |
TG1 |
TB1 |
ABLE®K |
DH12STM |
LE392 |
PR700 |
BL21(DE3)
pLysS |
| JM101 |
JM83 |
TKB1 |
HMS174 |
ES1301 |
M1061 |
Q358 |
BMH 71-18 |
| All NM strains |
All Y strains |
Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom mini memiliki biomassa optimal 10-15. Misalnya, jika OD600 adalah 3,0, volume kultur optimal harus 1-5 mL.
Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.
Penyimpanan dan Stabilitas : Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.
Sebelum memulai :
Dua prosedur penghilangan endotoksin disediakan. Protokol A menghilangkan endotoksin selama pemurnian DNA plasmid dan Protokol B menghilangkan endotoksin setelah pemurnian DNA plasmid. Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet petunjuk ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah dan memberi perhatian khusus pada yang berikut
Important :
RNase A: Stabil selama setengah tahun di bawah suhu kamar. Putar vial RNase A sebentar. Tambahkan larutan RNase A ke buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan. Tambahkan 8 mL (PD1220-00) atau 60 mL (PD1220-01) atau 216 mL (PD1220-02) etanol 96-100% ke setiap botol DNA Wash Buffer sebelum digunakan. Buffer B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50 ° C untuk melarutkan endapan sebelum digunakan. Penyangga N3 dapat membentuk endapan di bawah 10 ° C, pemanasan pada 37 ° C untuk melarutkan endapan sebelum digunakan. Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan. Pastikan tersedianya centrifuge berkemampuan 13.000 rpm. Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.
Materials supplied by users
- 96-100% ethanol.
- 1.5 mL and 2.0 mL microcentrifuge tubes.
- High speed microcentrifuge or Vacuum manifold.
Kit Contents
| Catalog Number |
PD1220-00
|
PD1220-01
|
PD1220-02
|
| Preps |
4
|
50
|
250
|
| ezBind Columns |
4
|
50
|
250
|
| Buffer A1 |
1.2 mL
|
15 mL
|
70 mL
|
| Buffer B1 |
1.2 mL
|
15 mL
|
70 mL
|
| Buffer D1 |
120 µL
|
1.5 mL
|
7.0 mL
|
| Buffer N3 |
300 µL
|
4 mL
|
20 mL
|
| Buffer RET |
2.5 mL
|
30 mL
|
135 mL
|
| DNA Wash Buffer* |
2 mL
|
15 mL
|
54 mL
|
| Endofree Elution Buffer |
1 mL
|
10 mL
|
30 mL
|
| RNase A
(20 mg/mL) |
0.2 mg
（10 µL)
|
1.5 mg
（75 µL)
|
7 mg
(350 µL)
|
| User Manual |
1
|
1
|
1
|
* Tambahkan 8 mL (PD1220-00) atau 60 mL (PD1220-01) atau 216 mL (PD1220-02) etanol 96-100% ke setiap botol DNA Wash Buffer sebelum digunakan.
Safety Information
Buffer N3 mengandung asam asetat, pakai sarung tangan dan kacamata pelindung saat menangani. Buffer N3 dan RET mengandung garam chaotropic, yang dapat membentuk senyawa reaktif jika digabungkan dengan pemutih. Jangan menambahkan pemutih atau larutan asam langsung ke limbah persiapan.
MORE INFO :
——————————————
Website : www.bmdstore.com
No Kantor : 021-2943 2095
No HP : 0813 1754 7882
Email : [email protected]
