Product Description
Buffer LY, RB, RNA Wash Buffer, DEPC-Treated ddH2O, ezBind Columns, Collection Tubes, DNase I (Opsional), Menu Pengguna
Fitur: Jaringan, sel eukariotik Kit miniprep pemurnian RNA: Memurnikan hingga 100μg total RNA dari 5 × 106 sel eukariotik atau jaringan 30mg
pengantar
Kit RNA Jaringan EZgeneTM menyediakan metode yang mudah dan cepat untuk mengisolasi RNA total dari jaringan, sel yang dikultur dalam waktu 30 menit. Hanya jejak DNA genom yang ada dalam RNA yang dimurnikan, yang dapat dihilangkan dengan pengobatan DNase I (Lihat detail dalam protokol) bila diperlukan. Kit ini memurnikan hingga 100 µg dari total RNA dari sel eukariotik atau jaringan hewan. RNA yang dimurnikan siap untuk RT-PCR, Northern blotting, pemurnian poliA + RNA, perlindungan nuklease, dan terjemahan in vitro.
Kit contents
| Catalog# |
R6311-00 |
R6311-01 |
R6311-02 |
| Preps |
4 |
50 |
250 |
| Buffer LY |
2.4 mL |
28 mL |
135 mL |
| Buffer RB |
3 mL |
30 mL |
135 mL |
| RNA Wash Buffer |
2 mL |
20 mL |
3 x 24 mL |
| DEPC-Treated ddH2O |
500 µL |
10 mL |
30 mL |
| ezBind Columns |
4 |
50 |
250 |
| Collection Tubes |
8 |
100 |
500 |
| DNase I (Optional)* |
25 u |
300 u |
1500 u |
| DNase Stop Buffer |
200 µL |
2.4 mL |
12 mL |
Informasi keselamatan
Buffer LY mengandung garam chaotropic, yang dapat membentuk senyawa reaktif jika digabungkan dengan pemutih. Jangan menambahkan pemutih atau larutan asam langsung ke limbah persiapan, kenakan sarung tangan dan kacamata pelindung saat menangani.
Sebelum memulai
Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet petunjuk ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah.
Penting
Tentukan volume Buffer LY yang akan digunakan dan tambahkan 20 µL b-mercaptoethanol (b-ME) per 1 mL Buffer LY sebelum digunakan. Buffer LY berisi b-ME dapat disimpan pada suhu ruangan hingga 1 bulan. Kristal bisa terbentuk di Buffer LY, larutkan endapan pada 37 oC sebelum digunakan. Tambahkan 8 mL (R6311-00) atau 80 mL (R6311-01) atau 96 mL (R6311-02) etanol 100% ke RNA Wash Buffer sebelum digunakan. Etanol akhir adalah 80% (v / v).
Opsional
Tambahkan etanol 100% 800 µL atau 9,6 mL (R6311-01) atau 48 mL (R6311-02) ke DNase Stop Buffer sebelum digunakan. Etanol akhir adalah 80% (v / v).
Bahan disediakan oleh pengguna Microcentrifuge meja dan tabung steril 1,5 mL. Vakum manifold jika menggunakan protokol vakum. 100% etanol. b-mercaptoethanol. Opsional: DNase I, DNase Buffer
Catatan: Lakukan semua langkah termasuk sentrifugasi pada suhu ruangan
Trouble Shooting Guide
| Problems | Possible reasons | Suggested Improvements |
| Low A260/A280 ratios
|
Protein contamination | Do a Phenol:Chloroform extraction. Loss of total RNA (up to 40%) should be expected. |
| Low A260/A280 ratios
|
Guanidine Thiocyanate contamination
|
Add 2.5 volumes of ethanol and 0.1M NaCl (final concentration) to precipitate RNA. Incubate for 30 min at -20°C. Centrifuge at 10,000 g for 15 min at 4°C. Resuspend the RNA pellet in DEPC-treated water. |
| Low Yield | RNA in sample degraded
|
Freeze samples immediately in liquid nitrogen and store at -70°C after collect it. |
| Low Yield | The binding capacity of the membrane in the spin column was exceeded | Use of too much tissue sample exceeding the binding capacity of spin column will cause the decreasing of total RNA yield. |
| Low Yield | Ethanol not added to buffer | Add ethanol to the RNA Wash Buffer and DNase Stop Solution before purification. |
| Genomic DNA contamination
|
Too much total RNA sample was used in RT-PCR. | Reduce total RNA amount used in RT-PCR to 50-100 ng. |
| Genomic DNA contamination
|
The sample may contain too much genomic DNA.
|
Reduce the amount of starting tissue in the preparation of the homogenate. Most tissues will not show a genomic DNA contamination problem at 30 mg or less per prep.
Reduce cell numbers to 1-2×105 or increase buffer volume and do multiple loadings to column. |
Reviews
There are no reviews yet.