EndoFree plasmid ezFlow Midi kit 25 Preps PD1420-02

Product Description

Introduction

Kunci dari kit ini adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang dapat dibalik dengan sangat efisien ke kolom mini sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat kemudian dielusi dengan air steril atau buffer elusi. Plasmid yang diisolasi dengan protokol tradisional biasanya mengandung endotoksin tingkat tinggi (lipopolisakarida atau LPS). Untuk transfeksi jalur sel sensitif endotoksin atau injeksi mikro, endotoksin harus dibuang sebelum aplikasi. Sistem endofree EZgeneTM menggunakan buffer yang diformulasikan secara khusus yang mengekstrak endotoksin dari DNA plasmid. Ekstraksi dua putaran akan menurunkan tingkat endotoksin menjadi 0,1 EU (Endotoksin) per µg DNA plasmid. Kit miniprep plasmid ujung tiga menyediakan langkah pembuangan endotoksin yang efisien ke dalam prosedur pemurnian tradisional untuk menghasilkan DNA plasmid tingkat transfeksi. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 3 hingga 12 mL kultur E. coli. Kolom mini memiliki kapasitas pengikatan DNA 80 µg. Endofree DNA yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti transfeksi jalur sel sensitif endotoksin, sel biakan primer atau injeksi mikro.

Important Notes

Nomor Salinan Plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume buffer perlu ditingkatkan 2 kali. Silakan lihat Tabel 1 untuk plasmid yang umum digunakan.

Table 1 Commonly used plasmid and expected yield.

Plasmid	Origin	Copy Numbers	Expected Yield (µg per 1 mL)
pSC101	pSC101	5	0.1-0.2
pACYC	P15A	10-12	0.4-0.6
pSuperCos	pMB1	10-20	0.4-1
pBR322	pMB1	15-20	0.6-1
pGEM^R	Muted pMB1	300-400	6-7
pBluescript^R	ColE1	300-500	6-8
pUC	Muted pMB1	500-700	8-12

Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10, dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Silakan lihat Tabel 2 untuk informasi akhirA.

Table2 endA strains of E. Coli.

EndA- Strains of E. Coli

DH5α

DH1

DH21

JM106

JM109

SK2267

SRB

XLO

TOP10

DH10B

JM103

JM107

SK1590

MM294

Stbl2^TM

XL1-Blue

BJ5182

DH20

JM105

JM108

SK1592

Select96^TM

Stbl4^TM

XL10-Gold

EndA+ Strains of E. Coli

C600

JM110

RR1

ABLE^® C

CJ236

KW251

P2392

BL21(DE3)

HB101

TG1

TB1

ABLE^®K

DH12S^TM

LE392

PR700

BL21(DE3)

pLysS

JM101

JM83

TKB1

HMS174

ES1301

M1061

Q358

BMH 71-18

All NM strains

All Y strains

Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom mini memiliki biomassa optimal 10-15. Misalnya, jika OD600 adalah 3,0, volume kultur optimal harus 1-5 mL.

Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali lebih besar dari media kultur untuk memastikan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.

Penyimpanan dan Stabilitas : Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.

Sebelum memulai : Dua prosedur penghilangan endotoksin disediakan. Protokol A menghilangkan endotoksin selama pemurnian DNA plasmid dan Protokol B menghilangkan endotoksin setelah pemurnian DNA plasmid. Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet petunjuk ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah dan memberi perhatian khusus pada yang berikut,

Penting : RNase A: Stabil selama setengah tahun di bawah suhu kamar. Putar vial RNase A sebentar. Tambahkan larutan RNase A ke buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan. Tambahkan 8 mL (PD1222-00) atau 60 mL (PD1222-01) atau 96 mL (PD1222-02) etanol 96-100% ke setiap botol DNA Wash Buffer sebelum digunakan. Penyangga B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50 ° C untuk melarutkan endapan sebelum digunakan. Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan. Pastikan tersedianya centrifuge berkemampuan 13.000 rpm. Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.

Materials supplied by users

96-100% ethanol.
1.5 mL and 2.0 mL microcentrifuge tubes.
High speed microcentrifuge or Vacuum manifold.

Kit Contents

Catalog #	PD1222-00	PD1222-01	PD1222-02
Preps	4	50	250
ezBind Columns	4	50	250
Buffer A1	2.5 mL	25 mL	125 mL
Buffer B1	2.5 mL	25 mL	125 mL
Buffer D1	250 µL	2.5 mL	12.5 mL
Buffer N3	400 µL	5 mL	25 mL
Buffer RET	4 mL	50 mL	250 mL
DNA Wash Buffer*	2 mL	15 mL	3 x 24 mL
Endofree Elution Buffer	1 mL	10 mL	30 mL
RNase A(20 mg/mL)	0.25 mg (17.5µL)	2.5 mg (175 µL)	12.5 mg (625 µL)
User Manual	1	1	1

* Tambahkan 8 mL (PD1222-00) atau 60 mL (PD1222-01) atau 96 mL (PD1222-02) etanol 96-100% ke setiap botol DNA Wash Buffer sebelum digunakan.

Informasi keselamatan : Buffer N3 mengandung asam asetat, pakai sarung tangan dan kacamata pelindung saat menangani. Buffer N3 dan RET mengandung garam chaotropic, yang dapat membentuk senyawa reaktif jika digabungkan dengan pemutih. Jangan menambahkan pemutih atau larutan asam langsung ke limbah persiapan.

MORE INFO :
——————————————
Website : www.bmdstore.com
No Kantor : 021-2943 2095
No HP : 0813 1122 7684 (WA)
Email : [email protected]