Product Description
Introduction
Kunci kit pemurnian plasmid adalah sistem pengikatan DNA milik kami yang memungkinkan pengikatan DNA yang sangat efisien ke matriks ezBindTM kami sementara protein dan kotoran lainnya dihilangkan dengan penyangga pencuci. Asam nukleat mudah dielusi dengan air steril atau Elution Buffer. Tidak seperti kit lain di pasaran, kit pemurnian plasmid kami yang telah dipatenkan tidak memiliki garam chaotropic di buffernya. DNA yang dimurnikan adalah bebas residu resin penukar guanidin / anion. Sistem endofree EZgeneTM menggunakan buffer yang diformulasikan secara khusus yang mengekstrak endotoksin dari lisat bakteri. Tingkat endotoksin kurang dari 0,1 EU (Endotoksin) per µg DNA plasmid. Kit ini dirancang untuk pemurnian DNA plasmid yang cepat dan efisien dari 150 hingga 200 mL kultur E. coli. Kolom maxi memiliki kapasitas pengikatan DNA 1200 µg. Endofree DNA yang dimurnikan siap untuk aplikasi hilir seperti transfeksi jalur sel sensitif endotoksin, sel biakan primer atau injeksi mikro. Dua prosedur penghilangan endotoksin disediakan. Protokol A menghilangkan endotoksin selama pemurnian DNA plasmid dan Protokol B menghilangkan endotoksin setelah pemurnian DNA plasmid.
Catatan penting
Nomor salinan plasmid: Hasil DNA plasmid tergantung pada asal replikasi dan ukuran plasmid. Protokol dioptimalkan untuk pemurnian plasmid nomor salinan tinggi. Untuk plasmid dengan jumlah salinan rendah, volume kultur dan volume penyangga harus ditingkatkan 2 hingga 3 kali. Tabel Referensi 1 untuk plasmid yang umum digunakan,
Table 1 Commomly used plasmids
| Plasmid | Origin | Copy Numbers |
Expected Yield(µg per 200 mL) |
| pSC101 | pSC101 |
5 |
12 |
| PACYC | P15A |
10-12 |
25-40 |
| pSuperCos | pMB1 |
10-20 |
30-50 |
| pBR322 | pMB1 |
15-20 |
35-50 |
| pGEMR | Muted pMB1 |
300-400 |
350-450 |
| pBluescriptR | ColE1 |
300-500 |
450-600 |
| PUC | Muted pMB1 |
500-700 |
700-1,000 |
Strain Inang: Strain yang digunakan untuk menyebarkan plasmid memiliki pengaruh yang signifikan terhadap hasil. Strain inang seperti Top 10 dan DH5a menghasilkan DNA plasmid berkualitas tinggi. strain endA + seperti JM101, JM110, HB101, TG1 dan turunannya, biasanya memiliki hasil plasmid yang rendah karena endonuklease endogen atau karbohidrat tinggi yang dilepaskan selama lisis. Kami merekomendasikan untuk mengubah plasmid menjadi strain akhir jika hasil tidak memuaskan. Untuk memurnikan DNA plasmid dari strain endA + (Tabel 2), kami merekomendasikan menggunakan produk PD1713.
Table2 endA strains of E. Coli.
| EndA- Strains of E. Coli | ||||||||||||||
| DH5α | DH1 | DH21 | JM106 | JM109 | SK2267 | SRB | XLO | |||||||
| TOP10 | DH10B | JM103 | JM107 | SK1590 | MM294 | Stbl2TM | XL1-Blue | |||||||
| BJ5182 | DH20 | JM105 | JM108 | SK1592 | Select96TM | Stbl4TM | XL10-Gold | |||||||
| EndA+ Strains of E. Coli | ||||||||||||||
| C600 | JM110 | RR1 | ABLE® C | CJ236 | KW251 | P2392 | BL21(DE3) | |||||||
| HB101 | TG1 | TB1 | ABLE®K | DH12STM | LE392 | PR700 | BL21(DE3)pLysS | |||||||
| JM101 | JM83 | TKB1 | HMS174 | ES1301 | M1061 | Q358 | BMH 71-18 | |||||||
| All NM strains | All Y strains | |||||||||||||
Massa Sel Optimal (OD600 x mL Kultur): Prosedur ini dirancang untuk mengisolasi plasmid yang ditumbuhkan dalam media LB standar (Luria Bertani) selama 12 -16 jam dengan kepadatan OD600 2.0 hingga 3.0. Jika media kaya seperti TB atau 2xYT digunakan, pastikan kepadatan sel tidak melebihi 3.0 (OD600). Rasio tinggi biomassa di atas buffer lisis menghasilkan hasil dan kemurnian DNA yang rendah. Kolom maxi memiliki biomassa optimal 450-550. Misalnya, jika OD600 adalah 2,5, volume kultur optimal harus 200 mL.
Volume Kultur: Gunakan labu atau tabung dengan volume 4 kali media kultur untuk mengamankan kondisi optimal untuk pertumbuhan bakteri. Jangan melebihi volume kultur maksimum yang disarankan dalam protokol. Lisis yang tidak lengkap karena jumlah kultur bakteri yang berlebihan menghasilkan hasil yang lebih rendah dan kemurnian yang lebih rendah.
Penyimpanan dan Stabilitas Buffer A1 harus disimpan pada suhu 4 ° C setelah RNase A ditambahkan. Semua bahan lainnya dapat disimpan pada suhu kamar (22-25 ° C). Umur simpan yang dijamin adalah 12 bulan sejak tanggal pembelian.
Sebelum memulai Prosedur pembuangan endotoksin alternatif disediakan. Protokol A menghilangkan endotoksin selama pemurnian DNA plasmid dan Protokol B menghilangkan endotoksin setelah pemurnian DNA plasmid. Persiapkan semua komponen dan persiapkan semua bahan yang diperlukan dengan memeriksa buklet instruksi ini dan menjadi terbiasa dengan setiap langkah.
Penting RNase A: Stabil selama lebih dari setengah tahun bila disimpan pada suhu kamar. Putar botol RNase A sebentar. Tambahkan solusi RNase A ke Buffer A1 dan aduk rata sebelum digunakan. Simpan pada suhu 4 ° C. Penyangga B1 mengendap di bawah suhu kamar. Sangat penting untuk memanaskan buffer pada 50 ° C untuk melarutkan endapan sebelum digunakan. Tutup rapat untuk Buffer B1 setelah digunakan. Pastikan ketersediaan centrifuge, terlebih setelah mencampurkan lisat dengan ethanol, sampel perlu segera diolah baik dengan cara sentrifugasi. Jika tabung pengumpul tidak cocok dengan rotor sentrifugasi kecepatan tinggi, gunakan sentrifus benchtop dan putar pada 2.500 x g dengan waktu sentrifugasi ganda. Misalnya, sentrifugasi pada 2.500 x g selama 10 menit, bukan 5.000 x g selama 5 menit. Lakukan semua sentrifugasi pada suhu kamar.
Bahan disediakan oleh pengguna
70% etanol dan 100% etanol
Centrifuge kecepatan tinggi atau manifold vakum.
Tabung centrifuge kecepatan tinggi 30 mL dan tabung 50 mL.
Kit Contents
| Catalog # |
PD1520-00 |
PD1520-01 |
PD1520-02 |
| Preps |
2 |
10 |
25 |
| ezBindTM Columns |
2 |
10 |
25 |
| Buffer A1 |
22 mL |
110 mL |
270 mL |
| Buffer B1 |
22 mL |
110 mL |
270 mL |
| Buffer N3 |
8 mL |
40 mL |
85 mL |
| Buffer RET |
22 mL |
110 mL |
270 mL |
| RNase A(20 mg/mL) |
2.2 mg(110 μL) |
11 mg(550 μL) |
27 mg(1.35 mL) |
| Endofree Elution Buffer |
5 mL |
25 mL |
60 mL |
| User Manual |
1 |
1 |
1 |
MORE INFO :
——————————————
Website : www.bmdstore.com
No Kantor : 021-2943 2095
No HP : 0813 1754 7882
Email : [email protected]
Reviews
There are no reviews yet.